細(xì)胞和組織RNA核酸免提取試劑盒

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒采用zhuan利裂解液配方在10分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織樣本的裂解、提取和純化。無需使用蛋白酶K、無需低溫離心。該配方中含有RNA保護(hù)劑，能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA完整，從而提高RNA產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫構(gòu)建等。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

備注：第一次使用前，在洗滌液CW2中加入48mL無水乙醇，并標(biāo)記“√"和時(shí)間，避免重復(fù)加入。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、1.5mL無RNase離心管、DNase I（2U/μL，或貨號QR0102）

使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動(dòng)物組織中提取RNA

1.1.1 取20-100mg樣本放入液氮中充分研磨后，加入700μL裂解液C，顛倒混勻。

或者取20-100mg樣本加入700μL裂解液C，加入1顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨1-2分鐘。

備注：不同樣本中RNA含量差異很大，過多使用樣本容易導(dǎo)致堵塞，最終導(dǎo)致RNA提取量下降。

1.1.2 55℃孵育1分鐘。

1.1.3 12,000rpm離心1分鐘，取500μL上清。

1.1.4 加入250μL無水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

1.2 從懸浮細(xì)胞中提取RNA

1.2.1 細(xì)胞1,000rpm離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，加入500μL裂解液C。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，加入700μL裂解液C。輕輕吹打混勻。55℃孵育1分鐘。

1.2.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，取450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，取650μL上清。

1.2.5 加入0.5倍體積無水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

1.3 從貼壁細(xì)胞中提取RNA

1.3.1 yimei消化細(xì)胞后1,000rpm離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.3.2 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，加入500μL裂解液C。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，加入700μL裂解液C。輕輕吹打混勻。55℃孵育1分鐘。

1.3.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，取450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，取650μL上清。

1.2.5 加入0.5倍體積無水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

2. RNA純化

2.1全部加入RNA吸附柱中，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.2 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液CW1，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

2.3 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液CW2，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟2.3一次。

2.5 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.6 將RNA吸附柱放入新1.5mL無RNase離心管中，加入30-50μL洗脫液C，室溫放置1分鐘。

2.7 12,000rpm離心2分鐘，得到RNA溶液，-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1. 務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作，常換手套，防止RNA降解。

2. 盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取。

3. 使用無DNase無RNase的吸頭和離心管，防止RNA降解，常更換吸頭，防止交叉污染。

4. 為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液C置于65℃水浴后再使用。

5. 根據(jù)后續(xù)試驗(yàn)需求，請使用DNase I（貨號QR0102）進(jìn)行基因組清除。

常見問題解析